如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長下的總吸光度等丁各組分在相應(yīng)波長下吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個(gè)特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時(shí)，為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。已知葉綠素a、h的80%丙酮提取液在紅光區(qū)的最大吸收峰分別為663 nm 和645 nm，又知在波長663 nm下，葉綠素 a、b在該溶液中的吸光系數(shù)分別為82.04和9.27，在波長645 nm下分別為16.75和45.60。

葉綠素含量測定步驟是什么?

(1)取新鮮植物葉片(或其他綠色組織)或干材料，擦凈組織表面污物，剪碎(去掉中脈)，混勻。

(2)稱取剪碎的新鮮樣品0.2g，共3份，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2~3mL95%乙醇(或80%丙酮)，研成勻漿，再加乙醇10mL，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3~5min。

(3)取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤、沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25mL棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，最后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?/p>

(4)用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中，直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止。最后用乙醇定容至25mL，搖勻。

(5)把葉綠體色素提取液倒人光徑1 cm的比色杯內(nèi)。以95%乙醇為空白，在波長665nm、649mm和470nm下測定吸光度。

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